Pufferlösung

Der pH-Wert ist ein wichtiger Faktor bei der Durchführung der Ionenaustauschchromatographie, und pH-Stabilisierung und -Änderungen werden normalerweise mit Puffern erreicht, daher ist die Wahl des Puffers ein wichtiger Faktor, der die Trennung beeinflusst.

Bei der Auswahl eines Puffers sind pH-Wert und Ionenstärke zwei Schlüsselfaktoren, die nicht nur die Trennung des Zielprodukts von den Verunreinigungen, sondern auch die Ausbeute des Produkts beeinflussen. Der gewählte pH-Wert hängt vom isoelektrischen Punkt, der Stabilität und der Löslichkeit des Zielprodukts ab, nicht nur um das abgetrennte Material zu einem Ion zu machen, das ausgetauscht werden kann, sondern auch um seine hohe Aktivität aufrechtzuerhalten. Auch der pK-Wert des Ionenaustauschers sollte berücksichtigt werden.

Da der Puffer selbst geladen ist, wird er auch mit dem kombiniert  Ionenaustauschchromatographiemedium . Diese Kombination führt zu zwei Arten von Interferenzen: Einerseits wird die Konzentration des Puffers verringert, wodurch die Pufferkapazität verringert wird. Andererseits wird es mit dem Trennmedium ausgetauscht, um mit dem Protein um die Austauschkapazität des Mediums zu konkurrieren. Vermeiden Sie daher bei der Verwendung von Anionenaustauschchromatographiemedien die Verwendung negativ geladener Puffer wie Phosphat. Vermeiden Sie bei der Verwendung von Kationenaustauschchromatographiemedien die Verwendung positiv geladener Puffer wie Tris.

Aufgrund der unterschiedlichen Arten von Trennmedien unterscheidet sich der anfängliche Prozess geringfügig. Wenn unter normalen Umständen Anionenaustauschchromatographiemedien verwendet werden, liegt der Anfangspuffer um 0,5–1 pH höher als der isoelektrische Punkt des Zielproteins; unter Verwendung einer Kationenaustauschschicht. Bei der Analyse des Mediums liegt der Ausgangspuffer um 0,5 bis 1 pH niedriger als der isoelektrische Punkt des Zielproteins.