Neue Oligo-dT-Harze zur mRNA-Reinigung und -Isolierung: Erforschung neuer Technologien auf Basis von geimpften magnetischen Beads und gejetteten Styrol/DVB-Harzen
Das neue Sunresin Seplife ®Das Oligo-dT-Affinitätsharz wurde für die Aufreinigung und Isolierung von mRNA aus In-vitro-Transkriptionsprozessen (IVT) entwickelt. Dank der 20-jährigen Erfahrung von Sunresin in der Herstellung von Spezialharzen haben wir eine einzigartige Technologie entwickelt, die durch Saatquellung ein 50 µm großes Polymerharz mit sehr einheitlicher Partikelgröße erzeugt. Das Harz ist ein vernetztes Polystyrol-Divinylbenzol-Harz, das mit Oligo-dT20 funktionalisiert ist. Es bindet mRNA effektiv von Komponenten des Transkriptionsprozesses, wie Enzymen und Plasmid-DNA.
Seplife
®Oligo dT wurde entwickelt, um den steigenden Bedarf an Selektivität, Kapazität und großtechnischer Downstream-Reinigung verschiedener mRNA-Konstrukte für Impfstoffe zu decken, darunter mRNA-Impfstoffe gegen COVID-19, Krebsimpfstoffe, AIDS-Impfstoffe sowie Impfstoffe zur Behandlung und Prävention seltener und anderer schwerwiegender Erkrankungen. Dieses Harz ermöglicht die selektive Anreicherung der mRNA über den Poly(A)-Schwanz mittels einfacher Reinigungsschritte mit Salz (0,5 M NaCl) und Wasser.
Die wichtigsten Merkmale von Oligo dT sind die einfache mRNA-Reinigung aus rohem Transkriptionsansatz zur effektiven Entfernung von Plasmid-DNA und anderen IVT-Komponenten, der vereinfachte Arbeitsablauf dank der einfachen Anpassung an verschiedene Säulentypen und die hervorragende Skalierbarkeit. Selbstverständlich ist das Harz so konzipiert, dass es eine hervorragende Stabilität gegenüber Temperaturen bis zu 65 °C bietet
°C und Alkalien für eine effiziente CIP aufweist.
Die von Sunresin entwickelte einzigartige Harztechnologie ermöglicht die Herstellung von Harzladungen von 50 kg und verringert so das Risiko von Schwankungen. Darüber hinaus bietet sie erstklassige Fertigungsmöglichkeiten unter GMP-Bedingungen und strengen Qualitätskontrollen.
Die Oberfläche der Harzmikrokügelchen wird mithilfe einer firmeneigenen Technologie hydrophiler gestaltet, um unspezifische Adsorption zu reduzieren. Dies wird durch die Anlagerung eines Liganden mit einem langen Spacerarm erreicht, wodurch die sterische Hinderung verringert, die Stofftransportrate erhöht und eine hohe dynamische Bindungsaffinität gewährleistet wird. Anschließend wird die Oberfläche der Kügelchen mit Poly(dT) funktionalisiert, um die Bindung von mRNA durch Basenpaarung mit dem Poly(A)-Schwanz der mRNA zu ermöglichen.
Dieses Poster präsentiert Anwendungen zur Aufreinigung von 1200 nt mRNA mittels Oligo-dT durch Anreicherung und Freisetzung unter Standardbedingungen für die mRNA-Aufreinigung. Die Beschichtung des Harzes ermöglicht außerdem die Reduzierung von Plasmid-DNA und anderen Komponenten des Transkriptionsgemisches.
Wir präsentieren außerdem die neu entwickelten, mit Oligo-dT funktionalisierten Magnetharze für eine einfache Reinigung und Trennung in der Forschung und Entwicklung. Diese Magnetkügelchen basieren auf einem Kernharz aus Polystyrol-Divinylbenzol, das mittels einer einzigartigen Impftechnologie hergestellt wird. Dadurch lassen sich einheitliche Kügelchen mit einem Durchmesser von 1 bis 3 Mikrometern erzeugen. Anschließend werden die Kügelchen mit Fe₃O₄ beschichtet und vollständig mit einer Polyurethanhülle umhüllt, die sie vollständig vor der Freisetzung des paramagnetischen Materials schützt.
Diese magnetischen Partikel ermöglichen eine einfache und schnelle Trennung von mRNA, wodurch der Prozess der Entwicklung und des Screenings neuer Gentherapien verbessert wird.
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