SP Seplife ®FF Agarose-Chromatographieharz

Agarose-Chromatographieharz  

SP seplife FF

SP Seplife ® FF Agarose-Chromatographieharz Produktprofil:

SP seplife ® FF  Chromatographieharz  ist ein neues hochvernetztes  Agarose-Chromatographieharz  unabhängig von Sunresin entwickelt. Es handelt sich um eine Art Propyl auf Sulfonsäurebasis, an das gebunden ist  Agarosegelfiltrations-Chromatographieharz . Starkes Kationenaustausch-Chromatographieharz mit hoher Durchflussrate, niedrigem Gegendruck, hoher dynamischer Belastung, guter chemischer Stabilität und mechanischen Eigenschaften, geringer unspezifischer Adsorption, hoher Rückgewinnungsrate, bequemer Skalierung, Verkürzung der Produktionszeit und Verbesserung der Produktivität. Es ist weit verbreitet in  Ionenaustausch-Trennung von Proteinen ,  Nukleinsäuren  Und  Peptide  stromabwärts von  Biopharmazeutika und Bioingenieurwesen .

SP Seplife ® Parameter des FF-Agarose-Chromatographieharzes:

SP Seplife ® FF Agarose-Chromatographieharz Testanweisung:

1. Säulenverpackung
Das Verpacken erfolgt gemäß Standardarbeitsanweisungen. Es muss sichergestellt werden, dass jedes Material Betriebstemperatur hat und das Gel vor dem Verpacken entgast werden muss.
2.Gleichgewicht
Äquilibrieren Sie die Säule mit 2 bis 5 Säulenvolumina der Beladungswaage und stellen Sie sicher, dass die Leitfähigkeit und der pH-Wert des Abwassers genau mit der Leitfähigkeit und dem pH-Wert des Beladungspuffers übereinstimmen.
Die Ausgleichslösung ist eine Pufferlösung mit niedriger Konzentration wie NaOAC, PBS und dergleichen. Eine häufig verwendete Ausgleichslösung ist 0,1 mol/L Acetatpuffer, pH 5,0.
3. Laden der Probe
(1) Die Probe wird mit einer Ausgleichslösung vorbereitet und die trübe Probe wird zum Beladen zentrifugiert und filtriert. Proben mit zu hoher Salzkonzentration werden verarbeitet und anschließend dispensiert.
(2) Im Allgemeinen wird das Zielprodukt auf einer Säule kombiniert, die Verunreinigungen mit einer Gleichgewichtslösung weggewaschen und ein Eluent zum Waschen des Zielprodukts ausgewählt.
(3) Das Ausmaß, in dem das Medium die Probenbestandteile adsorbiert, hängt von der Ladungsart der Probe, der Ionenstärke der mobilen Phase und dem pH-Wert ab. Die Salzkonzentration ist gering und das Medium adsorbiert fester an den Probenbestandteilen. Bei Verwendung von SP-Chromatographiemedien liegt der empfohlene pH-Wert 1 Einheit über dem isoelektrischen Punkt des Zielprodukts.
4.Elution
Die Elution kann durch Erhöhen der Salzkonzentration oder Erhöhen des pH-Werts und im Allgemeinen durch Erhöhen der Salzkonzentration erfolgen. Ein häufig verwendeter Eluent (Lösung B), wie zum Beispiel: 0,1 mol/L Acetatpuffer + 2 mol/L NaCl, pH 5,0.
5.Regeneration
Im Allgemeinen wird der Puffer mit einer hohen Salzkonzentration (enthält 1–2 mol/L NaCl) gewaschen oder der pH-Wert wird um das Zehnfache oder mehr gesenkt und dann mit einer Gleichgewichtslösung des gebundenen Proteins gewaschen, um das Gleichgewicht herzustellen.
Werden inaktivierte Proteine ​​oder Lipide bei der Regeneration nicht abgewaschen, können sie durch In-Place-Reinigung (CIP) entfernt werden.
6.CIP
(1) Proteine, die durch Ionenbindung gebunden sind, können mit 0,5 bis 1 Säulenbettvolumen 2 M NaCl entfernt werden.
(2) Bei ausgefällten Proteinen, hydrophob gebundenen Proteinen oder Lipiden kann zunächst mit 1 Säulenbettvolumen 0,1 M NaOH und dann mit einer Gleichgewichtspufferlösung gewaschen werden, bis der pH-Wert neutral ist.
(3) Bei stark hydrophob gebundenen Proteinen, Lipiden usw. mit dem 4- bis 10-fachen Bettvolumen an 70 %igem Ethanol oder 30 %igem Isopropanol waschen. Beachten Sie, dass die Konzentration des organischen Lösungsmittels allmählich in einem Gradienten zunimmt, da sonst leicht Blasen entstehen.
7. Lagerung
Versiegelt und bei 4–30 °C gelagert (Konservierungslösung besteht aus 20 % Ethanol + 0,2 Mol/L Natriumacetat), trocken, belüftet, sauber, kann nicht eingefroren werden;
Die gebrauchte Säule wird bei 4–8 °C, 20 % Ethanollösung + 0,2 Mol/L Natriumacetat, gelagert.

SP Seplife ® FF Agarose-Chromatographieharz Vorsicht:

(1)Säulenauswahl: Theoretisch kann die ideale Auflösung erreicht werden, solange die Säule lang genug ist. Da jedoch die Säulenflussrate mit dem Druckgradienten zusammenhängt, erhöht sich die Säulenlänge, um die Flussrate zu verlangsamen, und der Peak wird breiter und die Auflösung verringert sich; Der Durchmesser der Säule nimmt zu, was zu einer Zunahme der Ungleichmäßigkeit des Flüssigkeitsstroms und einer deutlichen Abnahme der Auflösung führt.
(2) Der pH-Wert und die Ionenstärke des Elutionspuffers müssen während des Reinigungsprozesses streng kontrolliert werden. Die Säulenchromatographie sollte nach der Probe durchgeführt werden und das SP-Chromatographiemedium muss gründlich mit dem Elutionspuffer äquilibriert werden.
(3) Das Säulenbett muss flach sein, ohne Rillen und Luftblasen, andernfalls sollte es neu gepackt werden.
(4) Die Flussrate sollte während des Elutionsprozesses streng kontrolliert werden und nicht zu schnell sein.
(5) Das Probenvolumen sollte klein und die Konzentration nicht zu hoch sein.
(6)Während der Beladung und des gesamten Elutionsprozesses wird ein Austrocknen der Zylinderoberfläche verhindert.