Fmoc / t-Bu Festphasensynthese
Die Fmoc-Methode ist eine neue Methode für
Festphasensynthese von Peptiden
Entwickelt von Carpino und Hart basierend auf der Boc-Methode.
Der grundlegende Unterschied zwischen der Fmoc/t-Bu(9-Fluorenylmethoxycarbonyl/tert-Butoxy)-Strategie und der Boc/Bzl-Strategie besteht in der Verwendung der alkalisch abspaltbaren Fmoc-Gruppe als Schutzgruppe für die α-Aminogruppe. Die Seitenkette wird durch t-Bu geschützt, das mit TFA abgespalten werden kann. Als Festphasenträger wird Wang-Harz mit säureempfindlichem Linkerarm verwendet, und der letzte Syntheseschritt erfolgt mit TFA. (Han Xiang et al.) Das 32-Peptid Thymosin α 1 wurde erfolgreich mittels der Fm oc Festphasenmethode synthetisiert, erzeugt von Fm oc-Asn(Trt)-W angResin. Boc schützt die Seitenketten-Aminogruppe von Lys, tert-Butylester (Ot-Bu) schützt die Seitenketten-Carboxylgruppe von Asp und Glu, t-Bu schützt die Seitenketten-Hydroxylgruppe von Ser und Thr und Trityl (Trt) schützt die Seitenketten-Amidgruppe von Asn. Die Gesamtausbeute beträgt 33,2 % und die Reinheit >98,8 %.
Die Fmoc-geschützte Aminosäure ist empfindlich gegenüber Basen, insbesondere sekundären Aminen, und kann mit Piperidin bei Raumtemperatur abgespalten werden. Unter diesen Bedingungen bleiben Z-basierte, Boc-basierte oder andere Aminoschutzgruppen unbeeinträchtigt.
Die Fmoc-Schutzgruppe ist säurestabil und kann unter milden alkalischen Bedingungen abgespalten werden. Sie können orthogonal zu säureempfindlichen Seitenkettenschutzgruppen eingesetzt werden und bietet die Vorteile milderer Reaktionsbedingungen, weniger Nebenreaktionen und hoher Ausbeute.
Die Reinigung des Produkts wird zudem erleichtert, wenn das Polyaryl-Analogon der Fmoc-Schutzgruppe an den N-Terminus des Polypeptids bzw. Proteine werden gebunden. Gleichzeitig weist die Fmoc-Gruppe eine charakteristische UV-Absorption auf und ermöglicht eine einfache Überwachung und Steuerung der Reaktion, wodurch sie zunehmend an Bedeutung gewinnt.
Mit der Entwicklung der Peptidsyntheseindustrie sind die Kosten für die Fmoc-Probe zum Schutz der Aminosäure-Rohstoffe stark gesunken, und die Fmoc-Methode hat die Boc-Methode nach und nach ersetzt und wird in der Festphasensynthese weit verbreitet eingesetzt.
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