Neue Oligo-dT-Harze für die mRNA-Reinigung und -Isolierung: Erforschung neuer Technologien auf der Basis von geimpften Magnetkügelchen und gespritzten Styrol/DVB-Harzen

Das neue Sunresin Seplife ®Das Oligo dT-Affinitätsharz ist für die Reinigung und Isolierung von mRNA aus Herstellungsprozessen der In-vitro-Transkription (IVT) konzipiert. Auf der Grundlage der 20-jährigen Erfahrung von Sunresin in der Herstellung von Spezialharzen haben wir eine einzigartige Technologie entwickelt, die durch Samenquellung ein 50-Mikron-Polymerharz mit sehr gleichmäßigen Partikelgrößen herstellt. Das Harz ist ein vernetztes Polystyrol-Divinylbenzol-Harz, funktionalisiert mit Oligo dT20. Das Harz fängt effektiv mRNA von Komponenten des Transkriptionsreaktionsprozesses ein, wie z. B. Enzymen und Plasmid-DNA.

Seplife ® Oligo dT wurde entwickelt, um den steigenden Bedarf an Selektivität, Kapazität und groß angelegter Downstream-Reinigung einer Reihe von mRNA-Konstrukten zu erfüllen, die in Impfstoffen verwendet werden, wie z. B. mRNA-COVID-19-Impfstoffe, Onkologie-Impfstoffe, AIDS-Impfstoffe, Behandlung und Prävention seltener Krankheiten usw andere schwere Krankheiten. Dieses Harz ermöglicht das selektive Einfangen der mRNA über den polyadenylierten (PolyA) Schwanz mithilfe einfacher Reinigungsschritte auf Salz- (0,5 M NaCl)- und Wasserbasis.

Zu den Hauptmerkmalen von Oligo dT zählen die einfache mRNA-Reinigung aus rohem Transkriptionsmix zur effektiven Entfernung von Plasmid-DNA und anderen IVT-Komponenten, ein vereinfachter Arbeitsablauf dank einfacher Anpassung an verschiedene Säulentypen und eine hervorragende Skalierbarkeit. Natürlich wurde das Harz so konzipiert, dass es eine hervorragende Stabilität gegenüber Temperaturen bis zu 65 °C und gegenüber Alkali für eine effiziente CIP aufweist.

Die von Sunresin entwickelte einzigartige Harztechnologie ermöglicht die Herstellung von Harzchargen von 50 kg und verringert so das Risiko von Schwankungen sowie erstklassige Fertigungsmöglichkeiten unter GMP-Bedingungen und strengen Qualitätskontrollen.

Die Oberfläche der Harzmikrokügelchen wird mithilfe einer proprietären Technologie modifiziert, um hydrophiler zu werden und so unspezifische Adsorption zu reduzieren. Dies wird durch die Zugabe eines Liganden aus einem langkettigen Spacerarm erreicht, wodurch die sterische Hinderung verringert, die Stofftransferrate erhöht und die hohe dynamische Bindung sichergestellt wird. Die Oberfläche der Perlen wird dann mit Poly(dT) funktionalisiert, um das Einfangen von mRNA durch Basenpaarung mit dem mRNA-PolyA-Schwanz zu ermöglichen.

In diesem Poster stellen wir Anwendungen zur Reinigung von 1200nt-mRNA mit Oligo dT unter Verwendung von Capture und Release unter Standard-mRNA-Reinigungsbedingungen vor. Darüber hinaus ermöglicht die auf dem Harz durchgeführte Beschichtung eine Reduzierung der Plasmid-DNA und anderer Komponenten des Transkriptionsmixes.

Wir präsentieren auch die neu entwickelten Magnetharze, die mit Oligo-dT für eine einfache Reinigung und Trennung in Forschungs- und Entwicklungsphasen funktionalisiert sind. Diese magnetischen Perlen basieren auf einem Kernharz aus Polystyrol-Divinylbenzol, das durch eine einzigartige Impftechnologie hergestellt wird, die die Herstellung monogroßer Perlen von 1 bis 3 Mikrometern ermöglicht. Diese Perlen werden dann mit Fe3O4 beschichtet und anschließend vollständig mit einer Polyurethanhülle überzogen, die die Perlen vollständig vor der Freisetzung des paramagnetischen Materials schützt.

Diese magnetischen Partikel ermöglichen eine einfache und schnelle Trennung der mRNA, wodurch der Prozess der Entwicklung und des Screenings neuer Gentherapien verbessert wird.