CM Seplife ®FF Agarose-Chromatographieharz

Agarose-Chromatographieharz  

CM seplife FF

CM Seplife ® FF Agarose-Chromatographieharz Produktprofil:

CM seplife ® Das FF-Chromatographiemedium ist eine neue Art von hochvernetztem Agarose-Chromatographiemedium, das unabhängig von Sunresin entwickelt wurde. Es handelt sich um ein schwaches Kation, das durch die Bindung von Carboxymethylgruppen an das Agarosegel-Filtrationschromatographiemedium entsteht.  Medien für die Ionenaustauschchromatographie . Es verfügt über eine hohe Durchflussrate, einen geringen Gegendruck, eine hohe dynamische Belastung, eine gute chemische Stabilität und mechanische Eigenschaften, eine geringe unspezifische Adsorption, eine hohe Rückgewinnungsrate, eine einfache Skalierung, kann die Produktionszeit verkürzen und die Produktionseffizienz verbessern. Weit verbreitet in  Reinigung durch Ionenaustauschchromatographie  von nachgeschalteten Proteinen,  Nukleinsäuren  Und  Peptide  In  Biopharmazeutika und Bioingenieurwesen .

CM Seplife ® Parameter des FF-Agarose-Chromatographieharzes:

CM Seplife ® Anleitung zum FF-Agarose-Chromatographie-Harz-Test:

1. Säulenverpackung
Verpackungsvorgang gemäß den Standardarbeitsanweisungen. Es muss sichergestellt werden, dass jedes Material Arbeitstemperatur hat und das Gel vor dem Verpacken entgast werden muss.
2.Gleichgewicht
Äquilibrieren Sie die Säule mit dem 2- bis 5-fachen Bettvolumen der Ladeausgleichslösung. Stellen Sie sicher, dass die Leitfähigkeit und der pH-Wert des Abwassers genau mit der Leitfähigkeit und dem pH-Wert des Ladepuffers übereinstimmen. Die Ausgleichslösung ist eine Pufferlösung mit niedriger Konzentration, wie z. B. Tris, PBS usw.
3.Laden
(1) Die Probe wird mit der Ausgleichslösung vorbereitet und die trübe Probe sollte vor dem Laden zentrifugiert und filtriert werden. Proben mit zu hoher Salzkonzentration werden nach der Verarbeitung vorbereitet.
(2) Im Allgemeinen wird das Zielprodukt an die Säule gebunden, die Verunreinigungen werden mit der Äquilibrierungslösung weggewaschen und dann wird der Eluent zum Waschen des Zielprodukts ausgewählt.
(3) Der Grad, in dem das Medium die Probenbestandteile adsorbiert, hängt von den Ladungseigenschaften der Probe, der Ionenstärke der mobilen Phase und dem pH-Wert ab. Die Salzkonzentration ist gering und das Medium adsorbiert die Probenbestandteile fester. Bei Verwendung von CM-Chromatographiemedien liegt der empfohlene pH-Wert 1 Einheit über dem isoelektrischen Punkt des Zielprodukts.
4.Elution
Erhöhen Sie die Salzkonzentration oder erhöhen Sie den pH-Wert für die Elution, was üblicherweise zur Erhöhung der Salzkonzentration verwendet wird.
5.Regeneration
Im Allgemeinen zuerst mit einem Puffer mit hoher Salzkonzentration (enthaltend 1–2 mol/L NaCl) waschen oder den pH-Wert um mehr als das Zehnfache des Säulenvolumens reduzieren und dann bei der Proteinbindung waschen, bis ein Gleichgewicht mit der Äquilibrierungslösung erreicht ist.
Sollten inaktivierte Proteine ​​oder Lipide vorhanden sein, die bei der Regeneration nicht ausgewaschen werden können, können diese mit CIP entfernt werden.
6.Reinigung vor Ort
(1) Das durch Ionenbindung gebundene Protein kann durch das 0,5- bis 1-fache des Bettvolumens von 2 M NaCl entfernt werden.
(2) Bei ausgefällten Proteinen, hydrophob gebundenen Proteinen oder Lipiden können Sie zunächst mit 1 M Bettvolumen 0,1 M NaOH spülen und dann mit Äquilibrierungspufferlösung waschen, bis der pH-Wert neutral ist.
(3) Bei Proteinen und Lipiden mit starker hydrophober Bindung mit dem 4- bis 10-fachen Bettvolumen 70 % Ethanol oder 30 % Isopropylalkohol waschen. Es ist zu beachten, dass die Konzentration des organischen Lösungsmittels allmählich in einem Gradienten zunimmt, da sonst leicht Blasen entstehen.
7. Lagerung
Versiegelt und bei 4–30 °C (Konservierungslösung besteht aus 20 % Ethanol) an einem trockenen, belüfteten, sauberen Ort gelagert und kann nicht eingefroren werden; Gebrauchte Säulen werden bei 4–8 °C in 20 %iger Ethanollösung gelagert.
8.Transport
Vermeiden Sie während des Transports Sonnenlicht, Regen und starken Druck. Der Transport mit giftigen und schädlichen Materialien ist strengstens verboten.

CM Seplife ® FF-Agarose-Chromatographie-Harz Angelegenheiten, die Aufmerksamkeit erfordern:

(1) Säulenauswahl: Theoretisch können Sie die ideale Auflösung erzielen, solange die Säule lang genug ist. Da jedoch die Säulenflussrate mit dem Druckgradienten zusammenhängt, führt eine Erhöhung der Säulenlänge zu einer langsameren Flussrate und einem Peak verbreitert sich und die Auflösung nimmt ab; der Durchmesser der Säule nimmt zu, so dass die Ungleichmäßigkeit des Flüssigkeitsstroms zunimmt und die Auflösung deutlich abnimmt. A
(2) Der pH-Wert und die Ionenstärke des Elutionspuffers müssen während des Reinigungsprozesses streng kontrolliert werden. Die Probe und das CM-Chromatographiemedium müssen vor der Säulenchromatographie gründlich mit Elutionspuffer äquilibriert werden. A
(3) Das installierte Säulenbett muss flach und frei von Kanälen und Blasen sein, andernfalls sollte es neu installiert werden.
(4) Die Flussrate sollte während der Elution streng kontrolliert werden und nicht zu schnell sein.
(5) Das Probenvolumen sollte klein und die Konzentration nicht zu hoch sein.
(6) Verhindern Sie, dass der Zylinder während der Probenzugabe und des gesamten Elutionsprozesses austrocknet.