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Elution & Regeneration

Wenn das chromatographische Medium erschöpft ist, sollte es eluiert werdenNein.Das Grundprinzip besteht darin, das Zielprodukt durch eine aktivere Ionen oder Gruppe zu desorbierenNein.Unterschiedliche Sorbents unterscheiden sich in ihrer AktivitätNein.Daher sollte ein geeigneter Eluat ausgewählt werden, um das Protein ausChromatografie MedienNein.

Es gibt etwa drei Möglichkeiten, Ionenaustauschchromatografie zu umgehen:
Eine ist für die gleichzeitige AusrutschungNein.Das Elution ist eine verdünnte Säure, Alkali oder Salzlösung, und es kann auch ein geeignetes organisches Lösungsmittel verwendet werden, wobei die Salzlösung hauptsächlich verwendet wird und die Dosierungsform entsprechend der Art des Zielprodukts und des Endprodukts ausgewählt wirdNein.Da die zu absorbierende Substanz häufig keine einzige Art ist, ist die Ladung jeder Substanz unterschiedlich, und die Bindungsfestigkeit zum Medium ist unterschiedlichNein.Auch wenn derselbe Elution verwendet wird, fließt die leicht ersetzte Substanz zuerst aus dem Medium und die Bindungskraft ist starkNein.Nachdem das Material ausgeschieden ist, solange es durch Fraktionierung gesammelt wird, können verschiedene Stoffe getrennt werden, um ein relativ reines Produkt zu erhaltenNein.Diese Methode wird häufig zur Trennung verwendet, wenn die Leistung des Zielprodukts gut verstanden ist, oder zur Trennung analytischer ArtenNein.

Die zweite ist eine schrittweise Elution, dNein.hNein. Elution mit unterschiedlichen SalzkonzentrationenNein.Trennmedium Während des Austauschadsorptionsprozesses werden verschiedene Proteine adsorbiertNein.Wenn eine ständige Elution verwendet wird, ist es manchmal nicht möglich, alle Komponenten richtig zu trennen, und es ist notwendig, die Elutionsbedingungen zu ändernNein.Es kann eine stufenweise Veränderung sein, dNein.hNein. verschiedene Elutionen oder Elutionen mit unterschiedlichen pH -Werten werden für die Elution in Stufen verwendet, und verschiedene Elutionsspitzen können je nach verschiedenen Konzentrationen von Elutions und verschiedenen Säuregehalten gewonnen werdenNein.Das heißt, eine Salzkonzentration kann ein Zielprotein erhalten, und verschiedene Salzkonzentrationen können verschiedene Zielproteine erhaltenNein.Diese Schritt -für -Schritt -Elutionsmethode eignet sich für die Trennung von Proteinen bekannter Natur, insbesondere für die Scale -Produktion, einfach zu bedienen und leicht zu kontrollierenNein.

Der dritte Typ ist eine kontinuierliche Gradienteluierung, dNein.hNein. die Veränderung der Ionenstärke oder des pH -Werts des Eluats nach einer bestimmten linearen Veränderung (in der Regel nur in einem speziellen Fall mit Hilfe einer Elutionsmethode, die den pH -Wert ändert), im Prozess der Eluateinstufung werden im Prozess verschiedene Proteine replDie Proteine werden in der Regel nicht beschattet, da die Proteine von einem nach dem anderen transportiert werdenNein.Die Gradient elution ist die am häufigsten verwendete Elutionsmethode in der Ionenaustauschchromatographie, und sie ist auch die Elutionsmethode mit der stärksten Elutionsfähigkeit, die für die Elution ähnlicher Komponenten mit ähnlichen Ladungseigenschaften geeignet istNein.

Im Elutionsprozess kann entweder eine Cocurrent -Elution oder eine Gegenstrom -Elution verwendet werdenNein.Die Cocurrent -Elution wird auch Vorwärtselung genannt, dNein.hNein. die Strömungsrichtung des Elutions ist die gleiche wie die Strömungsrichtung der Arbeitsflüssigkeit, und die Gegenstromelution wird auch für die Reverse Elution genannt, die Strömungsrichtung des Elutions ist gegenüber der Strömungsrichtung des WoWirkende FlüssigkeitNein.Wird die Futterflüssigkeit durch die Austauschsäule von oben nach unten ausgetauscht und adsorbiert, so is t die Konzentration des Adsorbats in der oberen Schicht der Austauschsäule höher als die der unteren Schicht, und die umgekehrte Desorption des Eluats von unten nach oben kann t erreichenNein.Der Zweck der Flucht effizienterNein.Da die Reverse -Elution -Operation jedoch viel komplizierter ist als die VorwärtsElution, basiert sie meist auf einer positiven ElutionNein.

Die Strömungsgeschwindigkeit des Elutions beeinflusst auch die Trennung der Ionenaustauschchromatographie, und die Elutionsrate wird in der Regel konstant gehaltenNein.Im Allgemeinen ist die Auflösung der langsamen Elution besser als die der schnellen Elution, aber die Elutionsrate ist zu langsam, was zu langer Trennzeit, Nebenwirkungen wie Probendiffusion, Verbreiterung des Spektrums und reduzierter Auflösung führen wird, so dass sie von der tatsächlichen Situation abhängtNein.Wählen Sie die entsprechende Elutionsrate ausNein.Sind die Elutionsspitzen relativ konzentriert, um Überschneidungen zu verursachen, so sollte der Gradientenbereich entsprechend reduziert oder die Elutionsgeschwindigkeit gesenkt werden, um die Auflösung zu erhöhenNein.Wenn die Auflösung gut ist, aber die Elutionsspitze zu groß ist, sollte die Elutionsrate entsprechend erhöht werdenNein.
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