Peptidsynthese ist die Produktion von Peptiden, Verbindungen, bei denen mehrere Aminosäuren über Amidbindungen verbunden sind. Peptide werden chemisch durch die Kondensationsreaktion der Carboxylgruppe einer Aminosäure an die Aminogruppe einer anderen synthetisiert. Der Schutz von Gruppenstrategien ist in der Regel erforderlich, um unerwünschte Seitenreaktionen mit den verschiedenen Aminosäure -Seitenketten zu verhindern. Die chemische Peptidsynthese beginnt am häufigsten am Carboxylende des Peptids (C-Terminus) und geht in Richtung Amino-Terminus (N-Terminus). Proteinbiosynthese (lange Peptide) in lebenden Organismen tritt in entgegengesetzter Richtung auf.
Die chemische Synthese von Peptiden kann unter Verwendung klassischer Lösungsphasen-Techniken durchgeführt werden, obwohl diese in den meisten Forschungs- und Entwicklungsumgebungen durch Festphasenmethoden ersetzt wurden. Die chemische Synthese erleichtert die Produktion von Peptiden, die in Bakterien, die Einbeziehung von unnatürlichen Aminosäuren, Peptid/Protein-Rückgrat-Modifikation und die Synthese von D-Proteinen, die aus D-Aminosäuren bestehen, schwer zu exprimieren sind.
Die etablierte Methode zur Herstellung von synthetischen Peptiden im Labor ist als feste Phasenpeptidsynthese (SPPS) bekannt. SPPS von Robert Bruce Merrifield, der von Robert Bruce Merrifield gearbeitet hat, ermöglicht den schnellen Zusammenbau einer Peptidkette durch aufeinanderfolgende Reaktionen von Aminosäurerivaten auf einer makroskopisch unlöslichen Lösungsmittel-Swollen-Perlenharz-Unterstützung.
Die feste Unterstützung besteht aus kleinen, polymeren Harzperlen, die mit reaktiven Gruppen (wie Amin- oder Hydroxylgruppen) funktionalisiert sind, die sich mit der entstehenden Peptidkette verbinden. Da das Peptid während der gesamten Synthese kovalent an der Unterstützung gebunden bleibt, können überschüssige Reagenzien und Seitenprodukte durch Waschen und Filtration entfernt werden. Dieser Ansatz umgeht die vergleichsweise zeitaufwändige Isolierung des Produktpeptids von Lösung nach jedem Reaktionsschritt, der bei der Verwendung der herkömmlichen Lösungsphasensynthese erforderlich wäre.
Jede Aminosäure, die an die Peptidkette N-Terminus gekoppelt ist die verwendete Schutzstrategie.
Das allgemeine SPPS-Verfahren ist eines der wiederholten Zyklen alternativer N-terminaler Entschützung und Kopplungsreaktionen. Das Harz kann zwischen den einzelnen Schritten gewaschen werden. Zunächst ist eine Aminosäure mit dem Harz gekoppelt. Anschließend wird das Amin entbrottet und dann mit der aktivierten Carboxylgruppe der nächsten Aminosäure zugesetzt. Dieser Zyklus wird wiederholt, bis die gewünschte Sequenz synthetisiert wurde. SPPS -Zyklen können auch Abdeckstufen umfassen, die die Enden nicht umgesetzter Aminosäuren aus der Reaktion blockieren. Am Ende der Synthese wird das Rohpeptid aus der festen Unterstützung gespalten und gleichzeitig alle Schutzgruppen unter Verwendung eines Reagenz wie Trifluoressigsäure entfernen. Das Rohpeptid kann aus einem nicht-polaren Lösungsmittel wie Diethylether ausgefällt werden, um organische lösliche Nebenprodukte zu entfernen. Das Rohpeptid kann unter Verwendung von Reversed-Phase HPLC gereinigt werden. Der Reinigungsprozess, insbesondere von längeren Peptiden, kann eine Herausforderung sein, da die kummulativen Mengen zahlreicher kleiner Nebenprodukte, die ähnlich dem gewünschten Peptidprodukt aufweisen, entfernt werden müssen. Aus diesem Grund werden sogenannte kontinuierliche Chromatographieprozesse wie MCSGP in kommerziellen Umgebungen zunehmend verwendet, um den Ertrag zu maximieren, ohne die Reinheit zu beeinträchtigen.
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