Agarosechromatographieharz
Sp Seplife ff
Sp Seplife® ff Chromatographieharz ist ein neues, hoch vernetztes Vernetzung Agarosechromatographieharz unabhängig von Sunresin entwickelt. Es ist eine Art von Propylbasis auf Sulfonsäurebasi Agarosegelfiltrationschromatographieharz. Starker Kationenaustauschchromatographieharz Mit hoher Durchflussrate, niedrigem Rückendruck, hoher dynamischer Belastung, guter chemischer Stabilität und mechanischen Eigenschaften, niedriger nicht spezifischer Adsorption, hoher Wiederherstellungsrate, bequemer Skalierung, Verkürzung der Produktionszeit und Verbesserung der Produktivität. Es ist weit verbreitet in Ionenaustauschtrennung von Proteinen, Nukleinsäuren Und Peptide stromabwärts von Biopharmazeutika und Bioengineering.
| Harzcode | Sp Seplife® ff |
| Aussehen | Weiße Kugel Perlen |
| Partikelgröße (μm) | 45 ～ 165 |
| Matrix | Seplife 6ff |
| Durchflussrate (cm/h) | <750 |
| Druck (MPA) | 0.3 |
| Hitzebeständigkeit | 121 ℃, in Wasser für 30 Minuten in Wasser |
| pH -Stabilität | 4 ~ 13 (langfristig), 3 ~ 14 (kurzfristig, CIP) |
| Anwendung | Proteine, Nukleinsäuren und Peptide stromabwärts von Biopharmazeutika und Bioengineering |
| Chemische Stabilität | Stabil in den folgenden Flüssigkeiten: alle gängigen wässrigen Puffer; 1 mol/l Natriumhydroxid; 8 mol/l Harnstoff; 8 mol/l Guanidinhydrochlorid; 70% Ethanol |
| Adsorption (mg / ml) | > 55 mg/ml Lysozym/ml |
| Ionenaustauschkapazität | 0,18 ～ 0,25 mmol /ml |
| Arbeitstemperatur. | 4 ~ 40 ℃ |
| Test-Bedingungen: Chromatographiespalte 16mm * 300 mm; Säulenbetthöhe 15 cm; Temperatur 25 ℃; Die mobile Phase betrug 0,1 mol / l NaCl. | |
1. Verpackung
Die Verpackung erfolgt gemäß den Standardbetriebsverfahren. Es muss sichergestellt werden, dass jedes Material die Betriebstemperatur hat und dass das Gel vor dem Verpacken entgast werden muss.
2. Gleichgewicht
Äquilibrieren Sie die Säule mit 2 bis 5 Säulenvolumina des Lastbilanzs und stellen Sie sicher, dass die Leitfähigkeit und der pH -Wert des Abwassers genau der Leitfähigkeit und dem pH -Wert des Ladungspuffers entsprechen.
Die Balance -Lösung ist eine niedrige Konzentrationspufferlösung wie NaOAC, PBS und dergleichen. Eine häufig verwendete Gleichgewichtslösung beträgt 0,1 mol/l Acetatpuffer, pH 5,0.
3. Beispielbelastung
(1) Die Probe wird mit einer Gleichgewichtslösung hergestellt, und die trübe Probe wird zentrifugiert und für die Belastung filtriert. Proben mit zu viel Salzkonzentration werden verarbeitet und dann abgegeben.
(2) Im Allgemeinen wird das Zielprodukt auf einer Säule kombiniert, die Verunreinigungen werden mit einer Gleichgewichtslösung weggespült und ein Elelent wird ausgewählt, um das Zielprodukt zu waschen.
(3) Das Ausmaß, in dem das Medium die Probenkomponenten adsorbiert, hängt von der geladenen Art der Probe, der Ionenstärke der mobilen Phase und dem pH -Wert ab. Die Salzkonzentration ist gering und die Medium adsorbiert den Probenkomponenten fester. Bei der Verwendung von SP -Chromatographie -Medien liegt der empfohlene pH -Wert 1 Einheit über dem isoelektrischen Punkt des Zielprodukts.
4.selution
Die Elution kann durchgeführt werden, indem die Salzkonzentration oder die Erhöhung des pH -Werts erhöht und im Allgemeinen die Salzkonzentration erhöht wird. Eine häufig verwendete Eluent (Lösung B) wie: 0,1 mol/l Acetatpuffer + 2 mol/l NaCl, pH 5,0.
5. REGENERATION
Im Allgemeinen wird der Puffer mit einer hohen Salzkonzentration (mit 1 ~ 2 mol/l NaCl) gewaschen oder der pH -Wert 10 -mal oder mehr reduziert und dann mit einer Gleichgewichtslösung des gebundenen Proteins zum Ausgleich gewaschen.
Wenn inaktivierte Proteine oder Lipide während der Regeneration nicht abgespült werden, können sie durch In-Ort-Reinigung (CIP) entfernt werden.
6.Cip
(1) Für Proteine, die durch eine ionische Bindung gebunden sind, kann es mit 0,5 bis 1 Säulenbettvolumen von 2 m NaCl entfernt werden.
(2) Für ausgefällte Proteine, hydrophobisch gebundene Proteine oder Lipide kann es zuerst mit 1 Säulenbettvolumen von 0,1 m NaOH und dann mit einer Gleichgewichtspufferlösung gewaschen werden, bis der pH -Wert neutral ist.
(3) Bei stark hydrophobisch gebundenen Proteinen, Lipiden usw. mit dem 4- bis 10 -fachen des Bettvolumens von 70% Ethanol oder 30% Isopropanol waschen. Beachten Sie, dass die Konzentration des organischen Lösungsmittels schrittweise zunehmend zunimmt, ansonsten leicht Blasen erzeugen.
7.Storage
Versiegelt und auf 4 ~ 30 ℃ gelagert (Konservierungslösung beträgt 20% Ethanol + 0,2 mol/l Natriumacetat), trocken, belüftet, sauberer Ort, kann nicht eingefroren werden;
Die verwendete Säule wird bei 4 ~ 8 ℃, 20% Ethanollösung +0,2 mol /l Natriumacetat gespeichert.
(1) Säulenauswahl: theoretisch kann die ideale Auflösung erhalten werden, solange die Säule lang genug ist breiter und die Auflösung abnimmt; Der Durchmesser der Säule nimmt zu, was zu einer Erhöhung der Ungleichmäßigkeit des flüssigen Flusses und zu einer signifikanten Abnahme der Auflösung führt.
(2) Der pH -Wert und die Ionenstärke des Elutionspuffers müssen während des Reinigungsprozesses streng gesteuert werden. Die Säulenchromatographie sollte nach der Probe durchgeführt werden und das SP -Chromatographie -Medium muss gründlich mit dem Elutionspuffer äquilibriert werden.
(3) Das Säulenbett muss flach sein, ohne Rillen und Luftblasen, sonst sollte es neu verpackt werden.
(4) Die Durchflussrate sollte während des Elutionsprozesses und nicht zu schnell kontrolliert werden.
(5) Das Volumen der Probe sollte gering sein und die Konzentration sollte nicht zu hoch sein.
(6) Während der Beladung und des gesamten Elutionsprozesses wird die Zylinderoberfläche daran hindern, auszutrocknen.
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