Pufferlösung

Der pH-Wert ist ein wichtiger Faktor beim Betrieb der Ionenaustauschchromatographie, und die Stabilisierung und Änderung des pH-Werts wird normalerweise mit Puffern erreicht. Daher ist die Wahl des Puffers ein wichtiger Faktor, der die Trennung beeinflusst.

Bei der Auswahl eines Puffers sind pH-Wert und Ionenstärke zwei Schlüsselfaktoren, die nicht nur die Trennung des Zielprodukts von den Verunreinigungen, sondern auch die Ausbeute des Produkts beeinflussen. Der gewählte pH-Wert hängt vom isoelektrischen Punkt, der Stabilität und der Löslichkeit des Zielprodukts ab, um das abgetrennte Material nicht nur zu einem austauschbaren Ion zu machen, sondern auch um seine hohe Aktivität aufrechtzuerhalten. Der pK-Wert des Ionenaustauschers sollte ebenfalls berücksichtigt werden.

Da der Puffer selbst geladen ist, wird er auch mit dem kombiniertIonenaustauschchromatographiemedium. Diese Kombination verursacht einerseits zwei Arten von Interferenzen, wodurch die Konzentration des Puffers verringert wird, wodurch die Pufferkapazität verringert wird; Andererseits wird es mit dem Trennmedium ausgetauscht, um mit dem Protein um die Austauschkapazität des Mediums zu konkurrieren. Vermeiden Sie daher bei Verwendung von Anionenaustauschchromatographiemedien die Verwendung negativ geladener Puffer wie Phosphat. Vermeiden Sie bei Verwendung von Kationenaustauschchromatographiemedien die Verwendung positiv geladener Puffer wie Tris.

Aufgrund der unterschiedlichen Arten von Trennmedien unterscheidet sich der anfängliche Prozess geringfügig. Unter normalen Umständen ist bei Verwendung von Anionenaustauschchromatographiemedien der Anfangspuffer um 0,5-1 pH höher als der isoelektrische Punkt des Zielproteins; unter Verwendung einer Kationenaustauschschicht Wenn das Medium analysiert wird, ist der Startpuffer um 0,5 bis 1 pH niedriger als der isoelektrische Punkt des Zielproteins.