SUNRESIN LAGERCODE 300487

seplite@sunresin.com + 86-29-89182091

Mehr Produkte

Anwendungsindustrien

Kontaktiere uns

Sunresin Park, Nr. 135, Jinye Road, Industrieentwicklungszone Xi'an Hitech, Shaanxi-710076, China
E-Mail: seplite@sunresin.comt
Tel.: + 86-29-89182091

Ni Seplife® 6FF (NTA)

Verarbeitung der Protein-, Nukleinsäure- und Polypeptidreinigung

Produktbeschreibung

Nickel-Chelat-Agarose-Chromatographie-Harz

Ni Seplife 6FF (NTA)

Produktprofil:
Ni-Chelat-Agarose-Chromatographie(NTA) bindet Iminodiessigsäure an 6FF-Agarosemedien und chelatisiert dann das Ni2 + -Ion alsaffinitätschromatographische Medien. Es ist weit verbreitet für dieVerarbeitung von Protein,NukleinsäureundPolypeptidreinigungin stromabwärts vonBiopharming und Bioengineering.

20200804083655

Harzparameter:

Harzcode Ni Seplife® 6FF (NTA)
Aussehen Kugelgelperlen
Partikelgröße (μm) 45 ~ 165
Matrix Seplife 6FF
Durchflussrate (cm / h) ≥370
Druck (MPa) 0.3
Ionenbindungskapazität (Ni2 + umol / ml): ~ 15
pH-Stabilität 3 ~ 13 (langfristig), 2 ~ 14 (kurzfristig, KVP)
Anwendung His-Tag-Proteinreinigung
Chemische Stabilität Stabil in Wasserpufferlösung, 0,1 M NaOH; 0,01 M HCl; 8M Harnstoff


Testanweisung:
1. Säulenverpackung
Das gesamte Material und Reagenz bei Raumtemperatur, Vorbereitung des anfänglichen Puffers und Elutionsbeffer.
2. Gleichgewicht
Balance mit 2 ~ 5 Bettvolumina der anfänglichen Pufferlösung, bis die Leitfähigkeit, der pH und andere Parameter unverändert sind.
3. Beispiel laden
(1) Die Probe wird im Allgemeinen in dem anfänglichen Puffer mit einem pH-Wert von 6 bis 8 gelöst, und eine Erhöhung des pH-Werts des Ladepuffers kann die Beladung erhöhen.
(2) Der Puffer sollte kein EDTA und Citrat enthalten, und es ist am besten, Reduktionsmittel wie Mercaptoethanol und DTT zu vermeiden.
(3) Die üblicherweise verwendete Pufferlösung enthält 10 bis 100 mmol / l Natriumphosphatpufferlösung, 20 bis 200 mmol / LTris-HCl-Pufferlösung.
(4) Dem Puffer werden im Allgemeinen 0,15 bis 0,5 mol / l NaCl zugesetzt, um den Ionenaustausch zu beseitigen.
(5) Bei erstmaliger Verwendung eines Nickelchelat-Agarosegels wird empfohlen, 50 mmol / l PBS (50 mmol / l NaH 2 PO 4, 0,5 mol / l NaCl, pH 7,4) als Ausgangspuffer zu verwenden.
4.Lösung
Die Elution wird im Allgemeinen in die folgenden Methoden unterteilt:
(1) Reduzieren Sie die pH-Elution: Die meisten Proteine ​​werden bei pH 6-4 (auch bei pH 3-4) eluiert, und der Puffer kann Natriumacetat-, Zitronensäure- und Phosphatpuffersysteme sein.
(2) Kompetitive Elution: Lineare Erhöhung oder Erhöhung der Konzentration konkurrierender Substanzen mit Affinität zu Metallionen (z. B. 0-0,5 mol / l Imidazol, 0-50 mmol / l Histidin, 0-2 mol / l NH 4 Cl).
(3) Elution des Chelatbildners: Chelatbildner wie EDTA und EGTA können mit Metallionen reagieren und bewirken, dass das Protein eluiert. Dieses Verfahren kann jedoch keine unterschiedlichen Proteine ​​trennen und beeinflusst die Adsorption von Proteinen, was dazu führt, dass das Fusionsprotein nicht hängen kann.
Bemerkungen:
(1) Wenn bei der ersten Verwendung die zur Elution erforderliche Imidazolkonzentration ungewiss ist, wird empfohlen, 10 mmol / l, 20 mmol / l, 50 mmol / l, 100 mmol / l, 200 mmol / l, 500 mmol / l zuzusetzen der anfängliche Puffer. Das Imidazol wurde eluiert und von niedrig nach hoch gesammelt, und die eluierten Ergebnisse wurden durch SDS-PAGE-Elektrophorese identifiziert.
(2) Das Imidazol ist alkalisch und der pH wird mit HCl eingestellt, nachdem der entsprechende Puffer hergestellt wurde.
(3) Durch Verringern der pH-Elution und Eluieren des Chelatbildners fallen die Metallionen ab, und die Metallionen müssen vor der nächsten Verwendung erneut chelatisiert werden.
(4) Bedingt kann eine lineare Elution mit Imidazol-Gradienten durchgeführt werden, um die bevorzugten Elutionsbedingungen zu bestimmen.
Für die obigen Elutionsverfahren müssen dem Puffer 150 bis 500 mmol / l NaCl zugesetzt werden, um den Ionenaustausch zu beseitigen.
5. Regeneration
(1) Das Gel muss nach wiederholtem Gebrauch oder wenn die chelatisierten Metallionen ersetzt werden müssen, denickt und regeneriert werden. Nickelentfernungsmethode: Spülen Sie die Säule zuerst mit 5 bis 10 Bettvolumina destilliertem Wasser, dann mit 5 bis 10 Bettvolumina 100 mmol / l EDTA und verwenden Sie schließlich 2 bis 3 Bettvolumina mit 0,5 mol / l NaCl-Waschmitteln Rest EDTA weg.
(2) Die mehrfach verwendete Säule muss im Allgemeinen nach der Nickelentfernung gereinigt werden. Reinigungsmethode: Drehen Sie die Säule mit 0,1 ~ 1,0 mol / l NaOH um, halten Sie sie 1 ~ 2 h bei 50 cm / h, um nicht nur die starken Verunreinigungen zu entfernen, sondern auch die Wärmequelle zu entfernen.
(3) Nach der Reinigung Metallionen erneut chelatisieren. Chelatisierungsverfahren: Zuerst wird die Säule nach der Nickelentfernung vollständig mit 2 bis 5 Bettvolumina destilliertem Wasser äquilibriert, und dann werden 0,1 bis 0,3 mol / l Metallsalzlösung verwendet, um 5 bis 10 Bettvolumina zum Chelatisieren von Metallionen zu leiten. Mit 5 bis 10 Bettvolumina destilliertem Wasser spülen, um nicht verwandte Metallionen zu entfernen.
6.CIP
(1) Entfernung von durch Ionenaustausch adsorbierten Proteinen: 2 bis 3 Bettvolumina wurden mit 2 mol / l NaCl-Lösung zurückgewaschen.
(2) Entfernung stark hydrophober Proteine ​​und Lipide usw.: 4 Bettvolumina wurden mit 70% Ethanol oder 30% Isopropanol zurückgewaschen.
(3) Entfernung von präzipitiertem Protein, hydrophobem Protein: Referenzgelregenerationsschritt.
7. Speicherung
Versiegelt und gelagert bei 4 ~ 30 ° C (20% Ethanol in Lagerlösung), trocken, belüftet, sauber, nicht gefroren; gebrauchte Säulen werden in 4 ~ 8 ° C, 20% iger Ethanollösung gelagert.


Vorsicht:
(1) Die Probe und Ni seplife®6FF (NTA) müssen mit dem Elutionspuffer äquilibriert werden und dann zur Chromatographiesäule gehen.
(2) Das Säulenbett muss flach und frei von Rillen und Luftblasen sein, andernfalls sollte es wieder eingebaut werden.
(3) Stellen Sie bei der Verwendung sicher, dass die Temperatur der Säule und des Puffers gleich sind, vermeiden Sie die Bildung von Blasen im Säulenbett und beeinträchtigen Sie den Reinigungseffekt.
(4) Die Durchflussrate sollte während des Elutionsprozesses streng kontrolliert werden und nicht zu schnell.
(5) Während des Ladens und des gesamten Elutionsprozesses wird verhindert, dass die Zylinderoberfläche austrocknet.

Unsere Produktliste

Neuesten Nachrichten

15 2020-12
Schwaches Säurekationenharz zur Trinkwasserenthärtung

Der Seplite LSF983 eignet sich sehr gut zur Entfernung der Härte (Kalzium und Magnesium) aus Trinkwasser (Haushaltswasserfilter, Krüge usw.), Getränke- und Lebensmittelanwendungen. Neben der Härte kann es auch helfen, bestimmte Schwermetallgehalte wie Kupfer, Blei usw. zu reduzieren.

11 2020-12
Sunresin lädt Sie ein, die 20. CPhI-Weltausstellung in Shanghai zu besuchen

Die 20. Weltausstellung für pharmazeutische Rohstoffe in China, CPhI China 2020, findet vom 16. bis 18. Dezember 2020 im Shanghai New International Expo Center (SNIEC) statt. Sunresin lädt Sie ein, die 20. CPhI-Weltausstellung in Shanghai zu besuchen.

08 2020-12
Makroporöses Adsorbensharz zur Reinigung von Kräuterextrakten

Sunresin entwickelte Seplite LXA8101, ein makroporöses Adsorbens auf der Basis einer polymerisierten Styrol-DVB-Matrix. Das Adsorbens wurde so entwickelt, dass es eine hohe Kapazität bietet und zur Reinigung vieler verschiedener Kräuterextrakte verwendet werden kann.

Leave a Message
Hier finden Sie vollständige Trennungs- und Reinigungslösungen
Sunresin Park, Nr. 135, Jinye Road, Hightech-Industrieentwicklungszone Xi'an, Shaanxi-710076, China
Schreiben Sie uns eine E-Mail:
Rufen Sie uns an:
+ 86-29-89182091

FOLGE UNS

Copyright ©Sunresin New Materials Co.Ltd.,Xi'an Alle Rechte vorbehalten