Nickelchelating Agarose Chromatographieharz
NI SEPLIFE 6FF (IDA) Anweisungen
Ni Chelating Agarose Chromatographie (IDA) ist bindende Iminodiasigsäure auf 6ff-Agarose-Medien und dann Chelatation von Ionen von Ni2 + als sein Affinität Chromatographic Media.. Es wird häufig für die verwendet Verarbeitung von Protein., Nukleinsäure und Polypeptidreinigung. im Down-Bach von Biopharming und Bioengineering..
| Harzcode | Ni SEPLIFE® 6FF (IDA) |
| Aussehen | Kugelgelperlen. |
| Partikelgröße (μm) | 45 ~ 165. |
| Matrix | SEPLIFE 6FF. |
| Fließgeschwindigkeit (cm / h) | ≥370. |
| Druck (MPa) | 0.3 |
| Ionen-Bindungskapazität. | (Ni2 + Umol / ml): ~ 15 |
| Referenz-Linearflussrate | 60 cm / h. |
| pH-Stabilität | 3 ~ 13 (langfristig), 2 ~ 14 (kurzfristig, cip) |
| Anwendung | Sein-Tag-Proteinreinigung |
| Chemische Stabilität | Stabil in der Wasserpufferlösung, 0,1 mol / l NaOH; 0,01 mol / l HCl; 8 Mol / l Carbamid |
1. Column Packing.
(1) Das gesamte Material und das Reagenz in Raumtemperatur, der anfänglichen Puffer und der Elution-Berffer vorbereitet.
(2) Nehmen Sie die Harzprobe gemäß der Säulengröße, waschen Sie 20% Ethanol zum Trocknen, verwenden Sie den Puffer (das Verhältnis von Harz: Puffer = 3: 1), um zur Behandlung von Homogenat- und Entgasung herzustellen.
(3) Verwenden Sie Wasser oder Puffer, um innen oder unterhalb der Spalte nass zu halten, der Wasser- oder Pufferspiegel sollte höher sein als das Filtermambran und stellen sicher, dass der Boden der Säule ohne Bobble sicher ist.
(4) Verwenden Sie die Glasstange, um Homogenat zusammen mit der Innenseite der Säule wieder in die Spalte zu führen, um eine Blase zu vermeiden. Öffnen Sie das Säulenauslassventil, um den Harz frei zu machen, und verbinden Sie die Spalteoberkappe gut.
(5) Öffnen Sie die peristaltische Pumpe, verwenden Sie den Puffer, um die Säule mit einer Flussrate von 1,33-fachen durchzuführen, als die Durchflussrate des Puffers normal mithilfe. Verwenden Sie 2-3BV-Puffer, um das Säulengleichgewicht zu erstellen.
2.Equilibrium
Balance mit 2 ~ 5 Bettvolumen der anfänglichen Pufferlösung bis zur Leitfähigkeit, pH-Wert, pH und anderer Parameter sind unverändert.
3.Ample Loading.
(1) Die Probe wird im Allgemeinen in dem anfänglichen Puffer von pH 6-8 gelöst, und das Erhöhen des pH-Werts des Ladepuffers kann die Belastung erhöhen.
(2) Der Puffer sollte EDTA und Citrat nicht enthalten, und es ist am besten, Verringerung von Mitteln wie Mercaptoethanol und DTT zu vermeiden.
(3) Die üblicherweise verwendete Pufferlösung weist 10 bis 100 mmol / l Natriumphosphat-Puffer-Lösung mit 20 bis 200 mmol / ltris-HCl-Pufferlösung auf.
(4) 0,15 bis 0,5 Mol / l NaCl werden im Allgemeinen dem Puffer hinzugefügt, um den Ionenaustausch zu beseitigen.
(5) Bei Verwendung eines Nickelchelat-Agarosegels zum ersten Mal wird empfohlen, 50 mmol / l PBS (50 mmol / l NAH2PO4, 0,5 Mol / l NaCl, pH 7,4) als Anfangspuffer zu verwenden.
4.Erigung.
Elution ist im Allgemeinen in die folgenden Methoden unterteilt:
(1) Die pH-Elution reduzieren: Die meisten Proteine werden bei pH 6-4 (auch bei pH 3-4) eluiert, und der Puffer kann Natriumacetat, Zitronensäure- und Phosphat-Puffersysteme sein.
(2) Wettbewerbsfähigkeit: linear steigend oder erhöhen Sie die Konzentration der konkurrierenden Substanzen mit Affinität zu Metallionen (z. B. 0-0,5 Mol / l Imidazol, 0-50 mmol / l Histidin, 0-2 Mol / l NH4Cl).
(3) Chelating-Agenten-Elution: Chelatbildner, wie EDTA und EGTA, können mit Metallionen reagieren, um das Protein eluieren zu lassen. Diese Methode kann jedoch nicht unterschiedliche Proteine trennen und beeinflusst die Adsorption von Proteinen, was dazu führt, dass das Fusionsprotein unfähig ist, das Fusionsprotein aufzuhängen.
(1) Wenn die Konzentration des für die Elution erforderlichen Imidazols zum ersten Mal unsicher ist, wird empfohlen, 10 mmol / l, 20 mmol / l, 50 mmol / l, 100mmol / l, 200 mmol / l, 500 mmol / l hinzuzufügen der anfängliche Puffer. Die Imidazol wurde eluiert und von niedrig bis hoch gesammelt, und die eluierten Ergebnisse wurden durch SDS-PAGE-Elektrophorese identifiziert.
(2) Die Imidazol ist alkalisch, und der pH-Wert wird mit HCl nach dem Hergestellt des entsprechenden Puffers eingestellt.
(3) Das Absenken der pH-Elution und der Elutierung des Chelatiermittels bewirkt, dass die Metallionen abfallen, und die Metallionen müssen vor der nächsten Verwendung erneut chelisiert werden.
(4) Konditionell kann eine Imidazol-Gradient-lineare Elution durchgeführt werden, um die bevorzugten Elutionsbedingungen zu bestimmen.
Für die obigen Elutionsmethoden müssen dem Puffer 150 bis 500 mmol / l NaCl hinzugefügt werden, um den Ionenaustausch zu beseitigen.
5. Reneneration.
(1) Das Gel muss nach wiederholter Verwendung abgelenkt und regeneriert werden, oder wenn es notwendig ist, die chelatisierten Metallionen zu ersetzen. Nickel-Entfernungsmethode: Spülen Sie zunächst die Säule mit 5 bis 10 Bettvolumen destilliertem Wasser, und spülen Sie die Säule mit 5 bis 10 Bettvolumen von 100 mmol / l EDTA ab und verwenden schließlich 2 bis 3 Bettvolumina von 0,5 Mol / l NACL-Wäschen weg restliche EDTA.
(2) Die für mehrfache verwendete Säule muss im Allgemeinen nach dem Nickelentfernung gereinigt werden. Reinigungsmethode: Umkehren der Säule mit 0,1 ~ 1,0 Mol / l NaOH, halten Sie es 1 ~ 2 h bei 50 cm / h halten, nicht nur die starken Verunreinigungen, sondern auch die Wärmequelle entfernen.
(3) Chelating von Metallionen nach der Reinigung erneut chelieren. Chelationsmethode: Erstens ist die Säule nach der Nickelentfernung mit 2 bis 5 Bettenvolumina destilliertem Wasser vollständig äquilibriert, und dann wird 0,1 bis 0,3 Mol / L-Metallsalzlösung verwendet, um 5 bis 10 Bettvolumina zu bestehen, um Metallionen zu chelatieren. Mit 5 bis 10 Bettvolumen destilliertem Wasser spülen, um nicht verwaltete Metallionen zu entfernen.
6. Cip.
(1) Entfernung von durch Ionenaustausch adsorbierten Proteine: 2 bis 3 Bettvolumina wurden durch 2 Mol / l NaCl-Lösung zurückgewaschen.
(2) Entfernung starker hydrophobischer Proteine und Lipide usw.: 4 Bettvolumina wurden mit 70% Ethanol oder 30% Isopropanol zurückgewaschen.
(3) Entfernung von ausgefälltem Protein, hydrophobem Protein: Referenzgelregenerationsschritt.
7.Storage.
Versiegelt und auf 4 ~ 30 ° C gelagert (20% Ethanol in Lagerlösung), trocken, belüftet, sauber, nicht eingefroren; Gebrauchte Säulen werden in 4 ~ 8 ° C, 20% Ethanol-Lösung gespeichert.
Vorsicht:
(1) Die Probe und NI SEPLIFE®6FF (IDA) müssen sein mit dem Elutionspuffer äquilibriert und dann zur Chromatographiesäule gehen.
(2) Das Säulenbett muss flach sein, frei von Nuten und Luftblasen, andernfalls sollte es neu installiert werden.
(3) Stellen Sie bei der Verwendung sicher, dass die Temperatur der Säule und der Puffer gleich sind, und vermeiden Sie die Erzeugung von Blasen im Säulenbett und beeinflussen den Reinigungseffekt.
(4) Die Flussrate sollte während des Elutionsprozesses streng kontrolliert werden, und nicht zu schnell.
(5) Während des Ladens und des gesamten Elutionsverfahrens wird die Zylinderoberfläche daran gehindert, auszutrocknen.
In dieser Woche im Hauptquartier von Sunresin in Xi'an wurde erfolgreich das Akzeptanztreffen des Sunresin (SZ.300487) -Argentina Angeles Salt Lake 25kt/A DLE Project abgehalten, das vertraglich war von Tibet Everest (Sh. 600338) im März 2022. Die Akzeptanzinspektion dieses Lithium -Carbonat -Extraktionsprojekts wird reibungslos verabschiedet. Die Qualität der systemischen Geräte von SR und streng geplanter Herstellungsprozess wird vom Inhaber zusammen mit den Experten Dritter stark bewertet.
![{[0] }s Vorsitzende in Forbes Chinas 50 Frauen in Technik aufgeführt](http://iqrorwxhnjqjlr5q.ldycdn.com/cloud/lkBprKqjljSRkjlpllqoiq/Forbes-China-s-50-Women-In-Tech.jpg)
Forbes China veröffentlichte letzte Woche seine Liste der \"Frauen in Tech 2022\" mit 50 chinesischen Frauen. Die Vorsitzende von Sunresin, Gao Yuejing, steht in Anerkennung ihrer Führung, um den Engpass der Innovation in der Adsorptions- und Trennungsindustrie kontinuierlich durchzubrechen und die Branche in eine breitere, tiefere und tiefere und stärkere Trennung zu bringen. Randpegel.
In jüngster Zeit wurde die Leistungsakzeptanz des Transformations- und Expansionsprojekts der 4.000 T/A -Lithium -Carbonat -Produktionslinie des Minmetals Salt Lake erfolgreich abgeschlossen, was die erfolgreiche Schlussfolgerung dieses Benchmark -Projekts der Lithium -Extraktion von Salt Lake markiert Sole. Der Bau dieses Projekts begann Ende November 2021 und hat eine Reihe herausfordernder Bedingungen wie die durch die Pandemie verursachten Covid -Sperr- und Logistikherausforderungen durchlaufen. Seit Beginn des Projekts hat Sunresin ein hochdediziertes, kundenorientiertes und lösungsgetriebenes Team mobilisiert, um den reibungslosen Betrieb des Projekts und die zeitnahe Implementierung und Produktion vor Ort zu gewährleisten.
Sunresin Park, Nr. 135, Jinye Road, Hightech-Industrieentwicklungszone Xi'an, Shaanxi-710076, China 
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