Agarosechromatographieharz
Cm seplife ff
CM Seplife® FF-Chromatographie-Medium ist eine neue Art von stark vernetztem Agarosechromatographie-Medium, das unabhängig von Sunresin entwickelt wurde. Es handelt sich um ein schwaches Kation, das durch Bindung von Carboxymethylgruppen mit Agarosegelfiltrationschromatographie -Medium gebildet wird. Ionenaustauschchromatographie -Medien. Es hat eine hohe Durchflussrate, einen hohen Rückendruck, eine hohe dynamische Belastung, eine gute chemische Stabilität und die mechanischen Eigenschaften, eine niedrige nicht spezifische Adsorption, eine hohe Wiederherstellungsrate, die leicht zu skalierende, die Produktionszeit verkürzen und die Produktionseffizienz verbessern. Weit verbreitet in Ionenaustauschchromatographiereinigung von nachgelagerten Proteinen, Nukleinsäuren Und Peptide In Biopharmazeutika und Bioengineering.
| Harzcode | CM Seplife® FF |
| Aussehen | Weiße Kugel Perlen |
| Partikelgröße(μm) | 45 ~ 165 |
| Matrix | Seplife 6ff |
| Durchflussrate (cm/h) | <750 |
| Druck (MPA) | 0.3 |
| Hitzebeständigkeit | 121 ℃, in Wasser für 30 Minuten |
| pH -Stabilität | 4 ~ 13 (langfristig), 3 ~ 14 (kurzfristig, CIP) |
| Anwendung | Proteine, Nukleinsäuren und Peptide stromabwärts von Biopharmazeutika und Bioengineering |
| Chemische Stabilität | Stabil in den folgenden Flüssigkeiten: alle gängigen wässrigen Puffer; 1 mol/l Natriumhydroxid; 8 mol/l Harnstoff; 8 mol/l Guanidinhydrochlorid; 70% Ethanol |
| Adsorption (mg / ml) | 60 mg/ml Lysozym/ml |
| Ionenaustauschkapazität | 0,09 ～ 0,13 mmol /ml |
| Arbeitstemperatur. | 4 ~ 40 ℃ |
| Test-Bedingungen: Chromatographiespalte 16mm * 300 mm; Säulenbetthöhe 15 cm; Temperatur 25 ℃; Die mobile Phase betrug 0,1 mol / l NaCl. | |
1. Verpackung
Verpackungsbetrieb gemäß den Standardbetriebsverfahren. Es muss sichergestellt werden, dass jedes Material Arbeitstemperatur ist und das Gel vor dem Packen entgast werden muss.
2. Balance
Äquilibrieren Sie die Säule mit dem 2- bis 5 -fachen des Bettvolumens der Ladeausgleichslösung. Stellen Sie sicher, dass die Leitfähigkeit und der pH -Wert des Abwassers genau der Leitfähigkeit und des pH -Werts des Belastungspuffers entsprechen. Die Balance-Lösung ist eine Lösung mit niedriger Konzentrationspuffer wie Tris, PBS usw.
3. Laden
(1) Die Probe wird mit der Gleichgewichtslösung hergestellt, und die trübe Probe sollte vor dem Laden zentrifugiert und filtriert werden. Nach der Verarbeitung werden Proben mit zu viel Salzkonzentration hergestellt.
(2) Im Allgemeinen ist das Zielprodukt an die Säule gebunden, die Verunreinigungen werden mit der Gleichgewichtslösung weggespült und dann wird das Eluenten ausgewählt, um das Zielprodukt zu waschen.
(3) Der Grad, in dem das Medium die Probenkomponenten adsorbiert, hängt von den geladenen Eigenschaften der Probe, der Ionenstärke der mobilen Phase und dem pH -Wert ab. Die Salzkonzentration ist gering und das Medium adsorbiert die Probenkomponenten fester. Bei der Verwendung von CM -Chromatographie -Medien ist der empfohlene pH -Wert 1 Einheit größer als der isoelektrische Punkt des Zielprodukts.
4.selution
Erhöhen Sie die Salzkonzentration oder erhöhen Sie den pH -Wert für die Elution, der üblicherweise zur Erhöhung der Salzkonzentration verwendet wird.
5. REGENERATION
Im Allgemeinen waschen Sie zuerst mit einem hohen Salzkonzentrationspuffer (enthält 1 ~ 2mol/l NaCl) oder reduzieren Sie den pH um mehr als das 10 -fache des Säulenvolumens und waschen Sie dann das Gleichgewicht mit der Gleichgewichtslösung beim Binden von Protein.
Wenn es inaktivierte Proteine oder Lipide gibt, die während der Regeneration nicht weggespült werden können, können sie mit CIP entfernt werden.
6. Cleaning an Ort und Stelle
(1) Für das durch eine ionische Bindung gebundene Protein kann es durch das Bettvolumen von 2 m NaCl um 0,5 ~ 1 entfernt werden.
(2) Bei ausgefällten Proteinen, hydrophobisch gebundenen Proteinen oder Lipiden können Sie zuerst mit 1 m Bettvolumen von 0,1 m NaOH abspülen und dann mit Gleichgewichtspufferlösung waschen, bis der pH -Wert neutral ist.
(3) Bei Proteinen und Lipiden mit starker hydrophober Bindung waschen Sie das 4- bis 10 -fache des Bettvolumens von 70% Ethanol oder 30% Isopropylalkohol. Es ist zu beachten, dass die Konzentration des organischen Lösungsmittels schrittweise allmählich zunimmt, sonst sind sie einfache Blasen erzeugt.
7.Storage
Versiegelt und auf 4 ~ 30 ℃ (Konservierungslösung ist 20% Ethanol) an einem trockenen, belüfteten, sauberen Ort und nicht eingefroren werden; Gebrauchte Säulen werden bei 4 ~ 8 ℃, 20% Ethanollösung gespeichert.
8.TRALALPORTATION
Vermeiden Sie Sonnenlicht, Regen und starker Druck während des Transports, und es ist streng verboten, mit giftigen und schädlichen Materialien zu transportieren.
(1) Säulenauswahl: Solange die Spalte lang genug ist, können Sie die ideale Auflösung erhalten, aber da die Säulenströmungsrate mit dem Druckgradienten zusammenhängt, macht die Erhöhung der Säulenlänge die Durchflussrate langsamer, die Spitze erweitert und die Auflösung abnimmt; Der Durchmesser der Säule nimmt zu, so dass die Ungleichheit des flüssigen Flusses zunimmt und die Auflösung signifikant abnimmt. A
(2) Der pH -Wert und die Ionenstärke des Elutionspuffers müssen während des Reinigungsprozesses streng gesteuert werden. Das Proben- und CM -Chromatographie -Medium muss vor der Säulenchromatographie gründlich mit Elutionspuffer äquilibriert werden. A
(3) Das installierte Säulenbett muss flach und frei von Kanälen und Blasen sein, sonst sollte es neu installiert werden.
(4) Die Durchflussrate sollte während der Elution und nicht zu schnell kontrolliert werden.
(5) Das Volumen der Probe sollte gering sein und die Konzentration sollte nicht zu hoch sein.
(6) verhindern, dass der Zylinder während der Probenaddition und des gesamten Elutionsprozesses austrocknet.
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